NY∕T 3264-2018 农用微生物菌剂中芽胞杆菌的测定(农业)
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ID： |
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文件大小(MB)： |
1.0 |
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页数： |
15 |
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日期： |
2021-12-20 |
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ICS 65.020.01,B 04 NY,中华人民共和国农业行业标准,~/T 3264--2018,农用微生物菌剂中芽胞杆菌的测定,Determ?nation of Bacillus in agricultural microbial agents,2018 - 07 - 27 发布2018 - 12 一01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,目。吕,本标准按照GB/T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口,NY/T 3264-2018,本标准起草单位: 南京农业大学、中国农业大学、中国农业科学院植物保护研究所、江苏省农业科学,院植物保护研究所,本标准主要起草人: 高学文、王琦、张杰、陈志谊、伍辉军、吴黎明、顾沁、束长龙、宋福平,I,农用微生物菌剂中芽胞杆菌的测定,1 范围,本标准规定了农用微生物菌剂中芽胞杆菌的检验方法,本标准适用于农用微生物菌剂中芽胞杆菌的测定,2 规范性引用文件,GB 4789 . 2 食品,GB 20287- 2006,3 术语和定义,3. 1. 1,芽胞杆菌,分类地位:,主要表型,1 个内生芽胞,3. 1.2,类芽胞杆菌属,分类地位:细菌界,主要表型特征:革兰,情况下不产生内生芽胞，但,芽胞,3. 1. 3,短芽胞杆菌属Brevibacillus,NY/T 3264-2018,日期的版本适用于本文,如芽胞,准主要,能形成,分类地位:细菌界厚壁菌门芽胞杆菌纲芽胞杆菌目类芽胞杆菌科短芽胞杆菌属,主要表型特征:革兰氏阳性，大多数好氧， 菌体杆状。大多数能够运动，周生鞭毛，能形成1 个内生,芽胞,3. 2,内生芽胞endospore,内生芽胞是某些细菌如芽胞杆菌在一定的环境条件下，能在菌体细胞内部形成一个圆形或卵圆形,休眠细胞，其能帮助细菌渡过逆境,1,NY/T 3264-2018,3. 3,脂肤化合物lipopeptide,微生物通过非核糖体途径合成的一类化合物。这类化合物含有亲水的肤链和亲油的脂肪酸腔链,从结构上可分为环状脂肤和线性脂肤。在芽胞杆菌中研究较多的是环状脂肤，主要有表面活性素Csurfactin),、泛革素C fengycin) 和杆菌霉素DCbacillomycin D)等,3. 4,伴胞晶体蛋白parasporal cηstal protein,伴胞晶体蛋白是少数芽胞杆菌如苏云金芽胞杆菌，在形成芽胞的同时，会在芽胞旁形成一颗或多颗,双锥形、方形或不规则形的蛋白晶体,3. 5,菌落形成单位colony forming UDits , CFU,在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称,为菌落形成单位， 以其计算单位体积中的活菌数量,4 试剂或材料,除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馆水或去离子水,4. 1 主要溶液,4. 1. 1 革兰氏染色剂:见附录A 中的A. 1 ,4. 1.2 芽胞染色剂:见A. 20,4. 1. 3 鞭毛染色剂:见A. 3 ,4. 1. 4 石炭酸复红染色液:见A. 4 ,4. 1.5 澳甲酣紫溶液:见A. 50,4. 1.6 澳靡香草酣蓝溶液:见A. 6 ,4. 1. 7 对氨基苯磺酸乙酸洛液: 见A. 7 ,4. 1.8 甲荼胶乙酸溶液:见A. 80,4. 1.9 二苯胶试剂: 见A. 9 ,4. 1. 10 二硝基水杨酸试剂:见A. 10 ,4. 2 培养基,4. 2. 1 酵母粉膜蛋白陈培养基CLB) :见附录B 中的B. 1 ,4. 2.2 厌氧培养基: 见B.2 ,4. 2. 3 葡萄糖蛋白陈培养基:见B. 3 ,4. 2.4 蛋白陈水培养基:见B. 4 ,4. 2. 5 淀粉水解培养基: 见B. 5 ,4. 2. 6 明胶培养基:见B.6 ,4. 2. 7 拧攘酸盐培养基:见B.7 ,4. 2.8 丙酸盐培养基:见B.8 ,4. 2. 9 苯丙氨酸培养基:见B. 9 ,4. 2. 10 发酵培养基CLandy) : 见B. 10 0,4. 2. 11 产胞培养基CSM) : 见B.ll ,4. 2.12 无氮培养基CAshby) :见B. 120,4. 2. 13 赫奇逊氏培养基(Hutchinson) :见B.13 0,5 仪器设备,除微生物实验室常规容器、灭菌设备及培养设备外，其他设备如下:,a) PCR 仪,b) 电泳仪,c) 质谱仪,d) 酶标仪,的气相色谱仪，配备氢火焰离,6 试样的制备,6. 1 抽样,抽样工具，如铲子、,同，如固体类的粉剂、,剂等。抽样方法按,件。随机抽取3,件。大包装产品,6. 2 样品制备,在无菌,7 操作步骤,1 X 102 稀释度的,无菌移液管),7. 2 涂板及计数,分别吸取100μL,稀释度做3 次重复，然,的菌量,7. 3 确证试验,7. 3. 1 菌种制备,NY/T 3264-2018,物菌剂剂型的不,干悬浮剂、微乳,包装箱为一,个平板表面，每1,自上述涂布计数中挑取5 个特征的单菌落，画线接种于LB 平板上， 3 7"C 培养48 h 左右。之后从每,一画线LB 平板中选取至少1 个良好分离的特征单菌落，转接保存，进行确证试验,7. 3. 2 形态观察,观察纯化菌落的形态特征，包括菌体颜色、表面和边缘特征、菌落的茹稠性等;挑选纯化的菌落做革,兰氏染色(4. 1. 1)、芽胞染色检测(4. 1. 2) 和鞭毛染色(4. 1. 3) ,7. 3. 3 生理生化确证试验,挑选纯化的菌落进行厌氧生长反应(4.2.2) 、v-p 反应(4 . 2 . 3) 、……
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